Hoy veremos en profundidad en qué consiste la tinción de Gram y para qué se utiliza. No hace mucho te contábamos qué tipos de bacterias existen y en el artículo te explicamos que existen muchas formas de clasificar una bacteria pero que una de ellas, es en función del tipo de pared bacteriana que presentan que hará que puedan teñirse con la tinción de Gram o no. De esta forma encontrábamos bacterias gram positivas y bacterias gram negativas.
Para poder entender mejor ese concepto, hoy profundizaremos en la tinción de Gram un tipo de tinción diferencial que se lleva utilizando en bacteriología desde 1875. La técnica fue creada por un microbiólogo danés denominado Christian Gram y supuso toda una revolución para el mundo de la microbiología ya que permitía a los científicos diferenciar claramente la morfología de las bacterias, además de que podían distinguir entre bacterias gram positivas, aquellas que se teñían de morado, de las bacterias gram negativas, las que tras la tinción se ven de color rosa o rojizas.
Cómo hacer una tinción de Gram y su fundamento
Tras recoger la muestra de bacterias que queremos teñir con un isopo procederemos a extenderla en un portaobjetos y a secarla o bien dejándola secar a temperatura ambiente o con un mechero, con cuidado de no quemar las bacterias. El siguiente paso es fijar la muestra en el portaobjetos mediante la aplicación de metanol durante un minuto.
Posteriormente se aplica el tinte de violeta de genciana, también conocido como cristal violeta, al portaobjetos y se deja reposar un minuto. Este colorante puede atravesar cualquier tipo de pared bacteriana por lo que tiñe tanto bacterias gram positivas como gram negativas.
Tinción de Gram en la que pueden observarse tanto bacterias gram negativas (bacilos) como bacterias gram positivas (cocos). Fuente: Wikimedia Commons
Luego se enjuaga la muestra con agua y se aplica lugol, de forma que cubra toda la muestra y se espera durante un minuto. El lugol es un compuesto formado principalmente por yodo que en este caso lo que hace es fijar el colorante violeta de genciana aún más a la muestra. El yodo del lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de alcohol y acetona durante 30 segundos, en este momento, es cuando finaliza realmente la tinción de Gram, ya que esta mezcla de alcohol y acetona lo que hace es disolver los complejos de lugol y violeta de genciana.
De forma opcional, puede realizarse un último paso que consiste en someter a las bacterias a una última tinción para teñir aquellas que son gram negativas de color rosa o rojo. Se hace de forma fácil aplicando durante un minuto un colorante como la safranina o fucsina y luego lavamos con agua.
Las bacterias gram positivas se tiñen de morado
En las bacterias gram positivas los complejos insolubles se quedan entre los filamentos de peptidoglicano de la pared bacteriana y por lo tanto no se disuelven, dejando las bacterias teñidas de morado, pero en las bacterias gram negativas estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color, por ello pueden diferenciarse un tipo bacteriano de otro. Las bacterias gram negativas se observaran incoloras, de color rosa o rojo, en función de si hemos realizado el último paso opcional de la técnica de tinción de Gram. Un ejemplo de bacteria gram positiva es Staphylococcus aureus y un ejemplo de bacteria gram negativa es Escherichia coli.
Con la tinción de Gram lo que estamos detectando es básicamente el tipo de pared celular de la bacteria que estamos analizando en ese momento. Aunque esta técnica tiene ciertas limitaciones pues existen bacterias que no presentan pared celular, como es el caso del género Mycoplasma. Además, a veces, otros factores como la edad de la muestra o el protocolo de la tinción pueden interferir en los resultados de la tinción, por lo que siempre se recomienda usar controles y realizar pruebas más exhaustivas en el caso de que se quiera identificar la bacteria.
